Peptide Competition Protocol

这个实验方案制备的“阻断/封闭”抗体，可以使用于蛋白印迹或免疫组织化学的实验。

1. 首先，确定您阻断/封闭实验所需要抗体的量。例如，如果你的正常实验做1：1000倍稀释，而且需要300 ul來染色放置在载玻片上的一张组织切片，您将需要0.3 ul的抗体添加于299.7微升的缓冲液，


2. 于不同的2管微量管中，分別取适当等量的抗体，稀释在100 μl PBS 或TBS缓冲液。当中1管加入相比较已经有抗体5-10份量的阻断/封闭肽；也就是说，如果你添加了1微克抗体，则应该加5-10微克的阻断/封闭肽，最后用PBS/TBS将总容积量带到200 ul。但在另1管中的抗体溶液，只添加相同体积的盐水或 PBS（亦即无阻断/封闭肽或任何抗原），并且轻轻混匀，这管可标签为“无肽”。


3. 于培育这2管时，在室温下放置1小时或在4℃放置过夜。


4. 培育后，用缓冲液（PBS-Tween/聚山梨醇酯缓冲液或您常用的抗体染色缓冲液）将溶液体积添加为300微升（或是添加至取决于抗体最初使用量的必要体积）。之后，使用您常用的抗体染色实验方案，去使用这2管的抗体（有和没有阻断/封闭肽的比较）。


5. 比较有和没有添加阻断/封闭肽之间的抗体染色图案差异。

[如有不明瞭处，請參阅英文Peptide Competition Protocol实验方案]