Peptide Competition Protocol

这个实验方案制备的“阻断/封闭”抗体,可以使用于蛋白印迹或免疫组织化学的实验。

  1. 首先,确定您阻断/封闭实验所需要抗体的量。例如,如果你的正常实验做1:1000倍稀释,而且需要300 ul來染色放置在载玻片上的一张组织切片,您将需要0.3 ul的抗体添加于299.7微升的缓冲液,
  2. 于不同的2管微量管中,分別取适当等量的抗体,稀释在100 μl PBS 或TBS缓冲液。当中1管加入相比较已经有抗体5-10份量的阻断/封闭肽;也就是说,如果你添加了1微克抗体,则应该加5-10微克的阻断/封闭肽,最后用PBS/TBS将总容积量带到200 ul。但在另1管中的抗体溶液,只添加相同体积的盐水或 PBS(亦即无阻断/封闭肽或任何抗原),并且轻轻混匀,这管可标签为“无肽”。
  3. 于培育这2管时,在室温下放置1小时或在4℃放置过夜。
  4. 培育后,用缓冲液(PBS-Tween/聚山梨醇酯缓冲液或您常用的抗体染色缓冲液)将溶液体积添加为300微升(或是添加至取决于抗体最初使用量的必要体积)。之后,使用您常用的抗体染色实验方案,去使用这2管的抗体(有和没有阻断/封闭肽的比较)。
  5. 比较有和没有添加阻断/封闭肽之间的抗体染色图案差异。

[如有不明瞭处,請參阅英文Peptide Competition Protocol实验方案]